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液相色譜儀是這么工作的,原來也不復雜

點擊次數:1225  發布時間:2020-02-13
  液相色譜儀是一種常用的色譜儀產品,主要由儲液器、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成,被廣泛用于多個領域中。
 

液相色譜儀

  液相色譜儀檢測的對象是高沸點、難氣化的大分子化合物,其具有高效、快速、靈敏的特點,在生物醫藥研究、檢測方面有較多的應用。然而,在使用液相色譜儀檢測生物醫藥上的樣品時,由于行業特性,樣品中的蛋白質殘留,時常會對液相色譜柱造成污染。
  工作原理:
  分配系數與組分、流動相和固定相的熱力學性質有關,也與溫度、壓力有關。在不同的色譜分離機制中,K有不同的概念:吸附色譜法為吸附系數,離子交換色譜法為選擇性系數?。ɑ蚍Q交換系數),凝膠色譜法為滲透參數。但一般情況可用分配系數來表示。
  在檢測生物物質如血漿或血清等積累在反相色譜柱上,必須采用不同與其他物質的清洗方法。大部分情況下,純有機溶劑如乙晴或甲醇不溶解多肽和蛋白質,因此不能有效地清洗柱子。反而,有機溶劑和緩沖液、酸、離子對試劑等的混合物則能有效地溶解。為確保液相色譜柱再生的效果,建議在使用溶劑沖洗色譜柱之前,了解色譜柱的填料類型以及確保使用的溶劑能與柱子的填料相容。硅膠基質的柱子通常來說都是相容的,但有機聚合物基質的柱子可能會在某些溶劑組合中膨脹或收縮,這樣會影響色譜柱的柱效。
  在使用溶劑清洗反相色譜柱時,須對每個溶劑系統至少要沖洗20體積。由于有些溶劑系統黏性很大,沖洗的流速應該相應調整以確保不會超過泵壓。當檢測的是尿液等樣品溶液時,至少應該用40~50體積的HPLC級水來沖洗柱子。
  液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。
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